A.  動(dòng)物保護(hù)組織的倫理；

 

    B. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法的不確定性：在藥效學(xué)試驗(yàn)中，90%以上經(jīng)過(guò)動(dòng)物 實(shí)驗(yàn)證實(shí)有效的藥物，在臨床試驗(yàn)中沒(méi)有獲得肯定的結(jié)果。在藥物的臨床前安全評(píng)價(jià)中，由于種屬差異的限制，很多實(shí)驗(yàn)結(jié)果（如免疫原性/免疫毒性，致癌試驗(yàn)，生殖毒理等）沒(méi)有臨床實(shí)驗(yàn)的指導(dǎo)意義。缺乏理想的動(dòng)物模型，本身的任何結(jié) 果都存在不確定性，使動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的價(jià)值降低。

 

    C. 經(jīng)濟(jì)成本和運(yùn)營(yíng)的要求：在藥物的臨床前安全評(píng)價(jià)中，用于購(gòu)買動(dòng)物和實(shí)施動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的費(fèi)用占整個(gè)安評(píng)費(fèi)用的50%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的周期長(zhǎng)，運(yùn)營(yíng)效率低，延誤臨床試驗(yàn)和上市時(shí)間，使藥物的成本增加。

 

    D. 替代實(shí)驗(yàn)方法的發(fā)展；

 

    E. 國(guó)際接軌

 

    4、推行替代方法的困難：

 

    科學(xué)上：

 

    ① 避免使用動(dòng)物與科學(xué)研究的需要相矛盾時(shí)，替代方法的任何理由都不具備挑戰(zhàn)價(jià)值。

 

    ② 3Rs本身存在有缺陷，缺乏可操作性。

 

    人類倫理上：

 

    ① 盡管動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的價(jià)值具有不確定性，但是，它是為了保護(hù)人類健康或臨床前毒理學(xué)研究和安全評(píng)價(jià)中，所能利用的終結(jié)工具。

 

    ② 任何政府的政策都不會(huì)為了保護(hù)動(dòng)物而增加人類的危險(xiǎn)，或承擔(dān)潛在的責(zé)任。

 

    5、3Rs的主要方法和技術(shù) -  體外 in vitro & 電腦模型 in silico

 

    替代Replacement：

 

    組織培養(yǎng)Tissue culture

 

    離體器官灌注Perfused organs

 

    組織切片Tissue slices

 

    細(xì)胞組分Cellular fractions

 

    亞細(xì)胞組分Subcellular fractions

 

    減少Reduction：

 

    計(jì)劃和實(shí)施過(guò)程中正確選擇實(shí)驗(yàn)策略；

 

    控制實(shí)驗(yàn)中使用動(dòng)物的變化；

 

    仔細(xì)設(shè)計(jì)和分析實(shí)驗(yàn)；

 

    計(jì)算機(jī)信息。

 

    優(yōu)化Refinement：

 

    非侵入式技術(shù)Non-invasive techniques；

 

    減輕疼痛的麻醉和鎮(zhèn)痛方案；

 

    訓(xùn)練動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中主動(dòng)配合；

 

    動(dòng)物住宿和環(huán)境條件優(yōu)渥。

 

    6、替代方法的現(xiàn)狀：

 

    研究進(jìn)展與相關(guān)投入： 各個(gè)發(fā)達(dá)國(guó)家研究成果頻繁報(bào)道，相關(guān)投入有增加趨勢(shì)。我國(guó)提倡替代方法科學(xué)家認(rèn)為，如不迎頭趕上，會(huì)受到相關(guān)研究技術(shù)壁壘的影響。

 

    各國(guó)使用動(dòng)物數(shù)量： 沒(méi)有減少，甚或增加，而且，不但數(shù)量增加，內(nèi)涵更加復(fù)雜，如轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型。

 

    各國(guó)、各地區(qū)相關(guān)組織及法規(guī)： 在發(fā)達(dá)國(guó)家，只要涉及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容，包括民間和政府機(jī)構(gòu)，在其指南中，都會(huì)有接受替代方法理念的陳述，但是，對(duì)于實(shí)施細(xì)則和步驟、時(shí)間表等， 均沒(méi)有強(qiáng)硬規(guī)定。（化妝品除外）

 

    中國(guó)：2015年中國(guó)毒理學(xué)會(huì)主辦了第一屆毒性測(cè)試替代方法與轉(zhuǎn)化毒理學(xué)（國(guó)際）學(xué)術(shù)研討會(huì)，此后每年舉辦一次，今年將于10月9-12日在廣州召開(kāi)第四屆研討會(huì)。但農(nóng)藥登記方面，并沒(méi)有相應(yīng)法規(guī)要求用替代方法。

 

    印度：只有化妝品注冊(cè)時(shí)用OECD 442B進(jìn)行皮膚致敏實(shí)驗(yàn)。農(nóng)藥登記領(lǐng)域沒(méi)聽(tīng)說(shuō)CIB有關(guān)于替代方法的要求。

 

    墨西哥：農(nóng)藥登記中，COFEPRIS僅接受使用哺乳動(dòng)物進(jìn)行的毒理實(shí)驗(yàn)（體內(nèi)）。

 

    美國(guó)：2018年4月10日，EPA官員發(fā)布消息稱，化學(xué)品和農(nóng)藥生產(chǎn)者可以提交不使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的皮膚致敏性研究報(bào)告用于登記申請(qǐng)。 替代實(shí)驗(yàn)包括2種細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，1種in chemico assay，可聯(lián)合使用，以替代局部淋巴結(jié)測(cè)定（LLNA，此法將受試化學(xué)品或農(nóng)藥施于小鼠耳朵上）。

 

    阿根廷：替代方法已用于化妝品注冊(cè)領(lǐng)域，但在農(nóng)化領(lǐng)域，SENASA短期內(nèi)不會(huì)接受新的體外測(cè)試方法，只有皮膚致敏實(shí)驗(yàn)指南OECD 406有可能會(huì)用OECD 442代替。

 

    巴西：最早于2014年提出毒性測(cè)試替代方法的要求并于2016年做了補(bǔ)充，要求實(shí)驗(yàn)室在5年之內(nèi)逐步采用替代方法。

 

    以下重點(diǎn)介紹巴西的毒性測(cè)試具體替代方法

 

    巴西的科技創(chuàng)新部于2014年9月24日承認(rèn)了國(guó)家動(dòng)物控制委員會(huì)（CONCEA）發(fā)布的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)毒性測(cè)試替代方法規(guī)范（Normative resolution No. 18），并要求巴西境內(nèi)的實(shí)驗(yàn)室在5年內(nèi)逐步替換或采用這些替代方法。

 

    該規(guī)范中列出了17種替代方法，分為7個(gè)組。

 

    第一組：皮膚刺激性/腐蝕性
 

 

    第二組：眼睛刺激性/腐蝕性

 

 

    第三組：光毒性 Phototoxicity

 

    OECD TG 432：in vitro 3T3 NRU Phototoxicity test 化學(xué)品體外3T3中性紅攝取光毒性試驗(yàn)方法

 

    第四組：皮膚吸收 dermal absorption

 

    OECD TG 428：Skin absorption: in vitro method 皮膚吸收：體外法

 

    第五組：皮膚致敏性

 

 

    第六組：急性經(jīng)口
 

 

 

    第七組：遺傳毒性genotoxicity

 

 

    國(guó)家動(dòng)物控制委員會(huì)（CONCEA）于2016年8月18日發(fā)布了第二批替代方法規(guī)范（Normative resolution No. 31），該規(guī)范中列出了新增的7種替代方法，分為4個(gè)組。

 

    第一組：眼睛刺激性/腐蝕性
 

 

 

    第二組：皮膚致敏性
 

 

 

    第三組：繁殖毒性
 

 

    第四組：評(píng)估注射產(chǎn)品熱原污染（contaminação  pirogênica em produtos injetáveis）

 

    Bacterial endotoxin test 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（巴西藥典Brazilian Pharmacopeia）。

 

    關(guān)于以上替代方法，巴西相關(guān)政府部門也指出，沒(méi)有一種單一的體外替代方法能完全取代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的方法。不過(guò)，利用分階段測(cè)試戰(zhàn)略，聯(lián)合使用替代方法可能會(huì)逐步取代動(dòng)物的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。