生姜是世界性藥食同源辛香蔬菜之一。中國(guó)生姜栽培面積、產(chǎn)量和出口量均居全球第一位。生姜產(chǎn)業(yè)在我國(guó)西南地區(qū)單產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益高,已被重慶市列入“七大特色農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)鏈”,作為推動(dòng)鄉(xiāng)村振興的優(yōu)選產(chǎn)業(yè)。姜辣素是生姜特有的呈味物質(zhì),也是生姜多種功能活性的主要功能因子,在調(diào)味品、化妝品和醫(yī)療保健等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。然而,長(zhǎng)久以來(lái)生姜基因組信息的缺乏,限制了我們對(duì)生姜基因組的研究和姜辣素合成調(diào)控機(jī)理的理解,導(dǎo)致了生姜分子育種發(fā)展緩慢。
2021年8月5日,Horticulture Research 在線發(fā)表了題為Haplotype-resolved genome of diploid ginger (Zingiber officinale) and its unique gingerol biosynthetic pathway的研究論文。
該研究破解了西南地區(qū)主栽品種竹根姜的基因組,利用短讀長(zhǎng)(369.51 Gb),長(zhǎng)讀長(zhǎng)PacBio(285.81 Gb)及Hi-C(563.16 Gb)策略組裝出竹根姜兩套單倍型高質(zhì)量基因組,單倍型的基因組大小分別為1.53 Gb (contig N50: 4.68 M) 和1.51 Gb (contig N50:5.28 M),98.11%的序列錨定到22條染色體(圖1)。PacBio 讀長(zhǎng)在2個(gè)單倍型的overlap分別為 97.95%和98.1%,顯示了分型的準(zhǔn)確性。兩套單倍型的Ka/Ks分析揭示生姜馴化歷史過(guò)程中經(jīng)歷了相似的選擇壓力。通過(guò)等位基因分析,總共55,635個(gè)基因(占所有基因的72%)在兩個(gè)單倍型中具有同源性。生姜17,226對(duì)等位基因中,11.9%在轉(zhuǎn)錄水平表現(xiàn)出染色體偏好性(圖2)。該研究發(fā)現(xiàn)生姜基因組雜合度3.6%,是目前已報(bào)道雜合度最高的植物基因組。重復(fù)序列高,其中長(zhǎng)末端片段重復(fù)(long terminal repeats,LTRs)占61.06%,可能是導(dǎo)致其基因組大、雜合度高的主要原因,同時(shí)也是生姜基因組進(jìn)化的主要驅(qū)動(dòng)力。生姜等位基因在兩套單倍型中沒(méi)有展現(xiàn)出表達(dá)差異,17,226對(duì)等位基因中有2055對(duì)(11.9%)在轉(zhuǎn)錄水平表現(xiàn)出染色體偏好性。
圖1. 生姜基因組特征統(tǒng)計(jì)。a. 染色體;b. 基因密度;c. SSR密度;d. LTR密度;e. GC含量。
圖2. 生姜兩套單倍型等位基因的比較。A. 兩個(gè)單倍型的單個(gè)染色體的Ka/Ks值;B. 生姜單倍型1和單倍型0等位基因分布圖(從內(nèi)到外:a. 雜合度比率;b. 等位基因;c. 雜合基因比率;d. DEL比率;e. 染色體數(shù)目;f. 等位基因鏈接);C. 兩個(gè)單倍型配對(duì)染色體中等位基因的FPKM值。
通過(guò)整合基因組、轉(zhuǎn)錄組和代謝組數(shù)據(jù)進(jìn)行整合分析,該研究構(gòu)建了生姜特有成分姜辣素的合成通路,篩選出12個(gè)參與姜辣素合成的關(guān)鍵酶家族(PAL, C4H, 4CL, CST, C3′H, C3OMT, CCOMT, CSE, PKS, AOR, DHN, 和DHT),鑒定出38個(gè)可能調(diào)控姜辣素合成的重要轉(zhuǎn)錄因子家族,并繪制出姜辣素合成的分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
圖3. 生姜中重要次級(jí)代謝產(chǎn)物定量分析及姜辣素合成通路解析。A. 樣本采集示意圖;B. 以正/負(fù)離子模式鑒定到的生姜根莖代謝產(chǎn)物的主成分分析;C. 姜辣素生物合成關(guān)鍵基因的表達(dá)通路。
該工作由劉奕清教授(重慶文理學(xué)院、長(zhǎng)江大學(xué))牽頭,西南大學(xué)和華大基因等參與共同完成。生物學(xué)研究中心董照明副教授為共同第一作者,夏慶友教授為共同通訊作者,趙萍教授、王翊教授和張艷副教授作為合作者參與。該研究得到了重慶文理學(xué)院生姜基因組重大專(zhuān)項(xiàng)、重慶市自然科學(xué)基金等項(xiàng)目的支持。